BAFF Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)

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B細(xì)胞活化因子屬腫瘤壞死因子超家族成員(TNFSF13B)，主要由單核細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞及T細(xì)胞產(chǎn)生，可促進(jìn)B細(xì)胞成熟和分化，在免疫應(yīng)答中起重要作用，并與自身免疫密切相關(guān)。膜型BAFF主要表達(dá)于抗原提呈細(xì)胞，蛋白酶可使之水解而轉(zhuǎn)變?yōu)榭扇苄訠AFF。

通常檢測(cè)BAFF的時(shí)候可以一起檢測(cè)BCL-1，NF-KB等指標(biāo)一起檢測(cè)。

Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測(cè)的方法。對(duì)已知表達(dá)蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)新基因的表達(dá)產(chǎn)物，可通過(guò)融合部分的抗體檢測(cè)。

BAFF Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)

與Southern或Northern雜交方法類(lèi)似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測(cè)物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。

經(jīng)過(guò)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類(lèi)型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。

注意事項(xiàng)：

1.  一抗、二抗的稀釋度、作用時(shí)間和溫度對(duì)不同的蛋白要經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定*條件。
 

2.  顯色液必須新鮮配置使用，zui后加入H₂O₂。
 

3.  DAB有致癌的潛在可能，操作時(shí)要小心仔細(xì)。