上海信帆生物進行酶聯(lián)免疫試劑盒（ELISA試劑盒）知識培訓(xùn)

大家在做elisa實驗的時候，難免會遇到不同的問題，比如標準曲線不好，試劑盒的

回收率，假陰性，假陽性，實驗的重復(fù)性不好等等。現(xiàn)在我們就來一一解答用戶朋友們在實驗過程中遇到的各種疑問！
 
曲線問題：
 
1.OD值不正常：試劑盒未回溫，試劑盒回溫到25℃
                            溫度控制不好，控制正確溫度
                           孵育時間不準確，控制孵育時間
                          洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增 加，洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干
                        陽光直射，對著風(fēng)直接吹，避風(fēng)避光
                        酶標儀的波長錯誤，酶標儀的波長450nm
                       抗體的稀釋錯誤，正確的稀釋抗體
                        水質(zhì)問題，用娃哈哈礦泉水代替
 
2.白   板：洗滌液配制錯誤，正確的配制洗滌液
             少加液體（錯加液體），正確的步驟加液體
           
 
3.無 梯 度：標準品也污染，換標準品點板
                     OD值不正常，控制溫度時間在做一次
                    人為點板，不要點板/
4.線 性 不 好：OD值不正常，控制溫度時間在做一次
                         
 
回收率：

1.空白管陽性高：樣本本身就是陽性樣本，換陰性樣本做回收率
                             空白管在實驗中被污染，實驗中防止交叉污染
                           水質(zhì)原因用，娃哈哈礦泉水代替
 
 
2.偏  高：添加量不準確，的添加量
          添加濃度不適合，添加合適的濃度
           取液吹干量多，準確的取液吹干
           取到其它相層液體，取需用相吹干
           復(fù)溶液未稀釋或加入量少，正確的稀釋復(fù)溶液
 
3.偏  低：添加量不準確，的添加量
          添加濃度不適合，添加合適的濃度
          取液吹干量少，準確的取液吹干
           復(fù)溶液稀釋錯誤或加入量多，正確的稀釋復(fù)溶液
          

 
 
假陰、陽性：
1，水質(zhì)原因：點復(fù)溶液驗證，用娃哈哈礦泉水代替
2，實驗操作原因： 吸取到其它相吹干，準確的取液吹干
                  離心不*，延長離心時間
                  樣本的污染，更換樣本
                  乳化未處理*，溫浴（70℃）處理乳化現(xiàn)象
3，儀器試劑原因：離心管未清洗干凈，正確的洗滌器具
                  有機溶劑的影響，做試劑空白看影響結(jié)果
4，衍生化試劑原因（長時間衍生化試劑變質(zhì)）,更換衍生化試劑
5，與曲線好壞相關(guān),，保證曲線的正常
 
 
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